⬅️ انواع PCR
1️⃣Common PCR
2️⃣Real-time PCR
3️⃣RT PCR
Common PCR:
👈👈اول از همه میریم سراغCommon PCR (PCRمعمول) که به دلیل فرمت ساده ای که داره بیشترین مدل رایج در دانشگاه هاست. این نوع PCR اسامی دیگه ای هم داره. گاها دیده شده بهش End point PCR( PCR نقطه انتهایی)،Traditional PCR (PCR سنتی) و Conventional PCR ( PCR رایج) هم گفته میشه! این نوع از PCR به روشی برای تکثیر اسیدهای نوکلئیک گفته میشه که میاد اون RNA یا DNA مورد نظر ما رو اونقدرررر تکثیر میکنه که درنهایت ما بیشترین مقدار کپی از قطعه موردنظرمونو داشته باشیم.
🤓👈اگه بخوایم اطلاعات بیشتری وارد ماجرا کنیم، باید بگیم که در طول فرآیند این نوع از PCR، ما باید صبور باشیم چون PCR اونقدرر ادامه پیدا میکنه تا رشته قابل تکثیری که ما تو آزمایش بدنبال اون هستیم، کامل تکثیر بشه و هیچی از مواد اولیه باقی نمونه برای همین بیشترین مقدار کپی رو به ما میده. بعد از تموم شدن پروسه ی PCR برای دیدن نتیجه کار، باید اونو ببریم روی ژل الکتروفورز.
✅️ ژل آگارُز( یه ماده پلیمریه که از بعضی از جلبک های قرمز درست میشه و برای جداسازی مولکول ها استفاده میشه) DNA رو براساس سایز به قطعه های مختلفی تقسیم میکنه. هرچی قطعه کوچیکتر باشه دورتر میره. حالا یعنی چی میره؟ کجا میره؟
👈👈ما به کمک شانه های مخصوصی روی ژل چاهک درست می کنیم. حالا حدود چند میکرولیتر از محصول PCR مون رو که Loading dye مخلوط کردیم توی چاهک ها میریزیم. ژل رو میذاریم داخل تانک الکتروفورز که توش رو با بافر پر کردیم و دستگاه رو میزنیم به برق. چون به دو سمت ژل الکتروفورز جریان برق با جریان منفی و مثبت متصله انتقال جریان از منفی به مثبت ایجاد میشه. .بافری هم توی دستگاه هست رساناست و باعث انتقال جریان برق میشه.. همونطور که همگی ما میدونیم DNA دارای بار منفیه پس با ایجاد جریان برق از قطب منفی به سمت قطب مثبت روی ژل آگارز حرکت می کنه. این جریان باعث میشه که قطعات ژنی با طول ها و وزن های مختلف از هم جدا بشن و به صورت باند در مناطق مختلقفی از ژل قرار بگیرن.
✅️خب حالا باید یه معیاری برای اینکه بفهمیم این باند ها دقیقا قطعه ژنی با چه طولی هستن داشته باشیم. برای این منظور از DNA Ladder استفاده می کنیم. DNA Ladder، یک مخلوطی از انواع توالی DNA است که طولشون مشخصه و به عنوان یک الگو برای فهمیدن طول تقریبی محصول PCR مون استفاده میشه. وقتی کار الکتروفورز تموم شد، ژل رو در محلول اتیدیوم بروماید میغلتونیم و بعد با کمک UV می تونیم کامل باند های ایجاد شده رو ببینیم و تحلیل کنیم. اجازه بدین زیاد وقت برای توضیح تکنیک الکتروفورز نذاریم چون قدیمی های کانال حتما میدونن که ما قبلا کاملا این تکنیک رو در کانال توضیح دادیم. اما فکر کنم دیدن تصویر زیر هم به یادآوری نحوه ی عملکرد الکتروفورز کمک کنه. تو عکس دوم شما کاملا میتونین ببینین که وقتی قطعات ژن های هدف که با دستگاه PCR تکثیر میشن روی ژل الکتروفور چطوری ابر اساس وزن و طولشون از هم جدا میشن. ردیف 1 DNA Ladder هست که چون ما طول توالیش رو میدونیم با کمکش می تونیم طول قطعات ژن های هدفمون رو به صورت تخمینی متوجه بشیم.
🔗آدرس سایت :
RTPmed.com
#PCR
#RealTimePCR
1️⃣Common PCR
2️⃣Real-time PCR
3️⃣RT PCR
Common PCR:
👈👈اول از همه میریم سراغCommon PCR (PCRمعمول) که به دلیل فرمت ساده ای که داره بیشترین مدل رایج در دانشگاه هاست. این نوع PCR اسامی دیگه ای هم داره. گاها دیده شده بهش End point PCR( PCR نقطه انتهایی)،Traditional PCR (PCR سنتی) و Conventional PCR ( PCR رایج) هم گفته میشه! این نوع از PCR به روشی برای تکثیر اسیدهای نوکلئیک گفته میشه که میاد اون RNA یا DNA مورد نظر ما رو اونقدرررر تکثیر میکنه که درنهایت ما بیشترین مقدار کپی از قطعه موردنظرمونو داشته باشیم.
🤓👈اگه بخوایم اطلاعات بیشتری وارد ماجرا کنیم، باید بگیم که در طول فرآیند این نوع از PCR، ما باید صبور باشیم چون PCR اونقدرر ادامه پیدا میکنه تا رشته قابل تکثیری که ما تو آزمایش بدنبال اون هستیم، کامل تکثیر بشه و هیچی از مواد اولیه باقی نمونه برای همین بیشترین مقدار کپی رو به ما میده. بعد از تموم شدن پروسه ی PCR برای دیدن نتیجه کار، باید اونو ببریم روی ژل الکتروفورز.
✅️ ژل آگارُز( یه ماده پلیمریه که از بعضی از جلبک های قرمز درست میشه و برای جداسازی مولکول ها استفاده میشه) DNA رو براساس سایز به قطعه های مختلفی تقسیم میکنه. هرچی قطعه کوچیکتر باشه دورتر میره. حالا یعنی چی میره؟ کجا میره؟
👈👈ما به کمک شانه های مخصوصی روی ژل چاهک درست می کنیم. حالا حدود چند میکرولیتر از محصول PCR مون رو که Loading dye مخلوط کردیم توی چاهک ها میریزیم. ژل رو میذاریم داخل تانک الکتروفورز که توش رو با بافر پر کردیم و دستگاه رو میزنیم به برق. چون به دو سمت ژل الکتروفورز جریان برق با جریان منفی و مثبت متصله انتقال جریان از منفی به مثبت ایجاد میشه. .بافری هم توی دستگاه هست رساناست و باعث انتقال جریان برق میشه.. همونطور که همگی ما میدونیم DNA دارای بار منفیه پس با ایجاد جریان برق از قطب منفی به سمت قطب مثبت روی ژل آگارز حرکت می کنه. این جریان باعث میشه که قطعات ژنی با طول ها و وزن های مختلف از هم جدا بشن و به صورت باند در مناطق مختلقفی از ژل قرار بگیرن.
✅️خب حالا باید یه معیاری برای اینکه بفهمیم این باند ها دقیقا قطعه ژنی با چه طولی هستن داشته باشیم. برای این منظور از DNA Ladder استفاده می کنیم. DNA Ladder، یک مخلوطی از انواع توالی DNA است که طولشون مشخصه و به عنوان یک الگو برای فهمیدن طول تقریبی محصول PCR مون استفاده میشه. وقتی کار الکتروفورز تموم شد، ژل رو در محلول اتیدیوم بروماید میغلتونیم و بعد با کمک UV می تونیم کامل باند های ایجاد شده رو ببینیم و تحلیل کنیم. اجازه بدین زیاد وقت برای توضیح تکنیک الکتروفورز نذاریم چون قدیمی های کانال حتما میدونن که ما قبلا کاملا این تکنیک رو در کانال توضیح دادیم. اما فکر کنم دیدن تصویر زیر هم به یادآوری نحوه ی عملکرد الکتروفورز کمک کنه. تو عکس دوم شما کاملا میتونین ببینین که وقتی قطعات ژن های هدف که با دستگاه PCR تکثیر میشن روی ژل الکتروفور چطوری ابر اساس وزن و طولشون از هم جدا میشن. ردیف 1 DNA Ladder هست که چون ما طول توالیش رو میدونیم با کمکش می تونیم طول قطعات ژن های هدفمون رو به صورت تخمینی متوجه بشیم.
🔗آدرس سایت :
RTPmed.com
#PCR
#RealTimePCR
Comments
Be the first to add a comment
Log in to comment