既然混合测试法有这么大的优势,为什么各国不从一开始就采取这个策略呢?
这是因为混合测试法有一个最大的缺点:假阴性率会增加,准确度下降。举两个假设的情况给大家解释为什么假阴性率会增加:
情况1:假设使用的是饱受争议的美国CDC的核酸RT-PCR检测试剂盒。这个试剂盒一共测三个新冠基因片段,其中两个是新冠特异的基因片段,第三个是所有类似于SARS的冠状病毒都有的基因片段。除此以外,还包括一个控制探针 (control probe) 针对人的RNase P基因。这个探针的目的是用来保障取样足够和RNA提纯过程没有出错。如果取样不够,或者RNA纯化出错导致RNA降解,探针就读不出数值,检测结果就是“无效(invalid)”,还需要重新再测。
如果有位阳性感染者,在鼻咽拭子取样的时候,样本量取得不够。如果对这个样本用美国CDC的核酸试剂盒进行单独的核酸检测,虽然新冠基因是阴性,RNase P控制探针的结果也是阴性,最终结果就显示“无效(invalid)”,还需要重新再测。
然而,如果把这个人的样本和其他4个人混合在一起,进行混合核酸测试——其他4位都是核酸阴性,且取到了足够的样本。这时,用美国CDC的核酸试剂盒去检测5个人的混合样本,测出新冠基因是阴性,RNase P的控制探针是阳性 (表明样本取样提纯没有出错),因此得出结论:这5位都是核酸阴性。那位阳性感染者得到的就是一个“假阴性”结果。
情况2:不同核酸检测的设计不同,导致试剂盒的敏感度和特异性也不同。假设所用核酸试剂盒的敏感度是500个新冠RNA/毫升。有一位阳性感染者取样,提纯样本里面的RNA以后,用1µg总RNA量来做RT-PCR,里面包含了500个新冠RNA/毫升,那么检测结果是阳性。可是如果他的样本和其他4个人混在一起检测,还是用1µg总RNA量来做RT-PCR,假设是等量混合,那么他的RNA实际只占~20%。1µg总混合RNA里面大约只有100个新冠RNA/毫升。受试剂盒敏感度的限制,结果会是假阴性。
因此,
混合测试对于
病毒含量高的样本比较合适,因其被稀释以后仍然能够超过试剂盒的敏感度。
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